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龙图腾网获悉国立大学法人大阪大学申请的专利敲入细胞的制作方法获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN113646429B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-07-11发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202080025993.1，技术领域涉及：C12N15/09；该发明授权敲入细胞的制作方法是由真下知士;吉见一人;夘野善弘;小谷祐子;宫坂佳树;冈雄一郎;佐藤真设计研发完成，并于2020-04-03向国家知识产权局提交的专利申请。

本敲入细胞的制作方法在说明书摘要公布了：发现了通过利用位点特异性核酸酶系统，能够在基因组DNA与供体DNA之间引起利用非同源末端结合和同源重组双方的修复，以高的效率和正确性制作敲入了长链的供体序列的细胞、生物，所述位点特异性核酸酶系统包含：同时靶向供体DNA的一方的同源臂序列和该同源臂序列所对应的基因组序列而进行切割的分子、和靶向该分子的切割位点的附近基因组区域而进行切割的分子的组合。

本发明授权敲入细胞的制作方法在权利要求书中公布了：1.在基因组DNA上的基因组编辑对象区域插入了供体序列的细胞或非人生物的制作方法，该方法包括将位点特异性核酸酶系统和供体DNA导入细胞或非人生物的工序， 所述供体DNA是包含从5’侧起依次配置有5’侧同源臂序列、供体序列、3’侧同源臂序列的碱基序列的DNA， 所述位点特异性核酸酶系统是靶向下述A组或B组的i至iii的序列而进行切割的系统，A组或B组的i和ii的序列由构成所述位点特异性核酸酶系统的同一分子靶向，iii的序列由构成所述位点特异性核酸酶系统的其他分子靶向， 在所述位点特异性核酸酶系统靶向下述A组的i至iii的序列而进行切割的情况下，所述供体序列通过对A组的i和ii的序列的切割的非同源末端结合修复、和介由3’侧同源臂序列的同源重组而被插入基因组编辑对象区域， 在所述位点特异性核酸酶系统靶向下述B组的i至iii的序列而进行切割的情况下，所述供体序列通过对B组的i和ii的序列的切割的非同源末端结合修复、和介由5’侧同源臂序列的同源重组而被插入基因组编辑对象区域， 所述位点特异性核酸酶系统是CRISPRCas9系统或CRISPRCas3系统，包含靶向所述A组或B组的i和ii的序列的向导RNA、和靶向所述A组或B组的iii的序列的向导RNA的组合， A组： i所述5’侧同源臂序列 ii所述基因组编辑对象区域中的i的序列的对应序列 iii所述基因组编辑对象区域中的、所述位点特异性核酸酶系统对ii的序列的切割位点的3’侧下游、且所述3’侧同源臂序列的对应序列的5’上游的序列 B组： i所述3’侧同源臂序列 ii所述基因组编辑对象区域中的B组的i的序列的对应序列 iii所述基因组编辑对象区域中的、所述位点特异性核酸酶系统对B组的ii的序列的切割位点的5’侧上游、且所述5’侧同源臂序列的对应序列的3’下游的序列。

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